TÉCNICA MOLECULAR EPIGENÓMICA EN NEUMONÍA POR VSR- Secuenciación y qRT-PCR de miARN

 Tema: Identificación de la diafonía de miARN-ARNm en la neumonía pediátrica asociada al virus respiratorio sincitial (RSV-) a través del análisis integrado de miARNoma y transcriptoma

Objetivo: identificar los biomarcadores potenciales e investigar los mecanismos moleculares de la neumonía pediátrica asociada al VSR grave.

Muestra: de sangre completa con EDTA de niños con infección por RSV (La infección por VRS se diagnosticó por: RT-PCR en hisopos nasofaríngeos)

Métodos:

1. Extracción de ARN de muestras de sangre total utilizando el reactivo TRIzol.  
2.  Los ARN totales extraídos se utilizaron para la secuenciación de alto rendimiento de miARN y ARNm. (Las bibliotecas de ARNm se construyeron utilizando el kit de preparación de bibliotecas de ARN NEBNext Ultra para Illumina)  
3. PCR cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR). -sistema de detección de PCR en tiempo real Bio-Rad CFX96 (Bio-Rad) usando SYBR Premix Ex Taq (TaKaRa) con cebadores específicos
• Usaron secuencias de cebadores para la transcripción inversa específicos para miARN 
• Usaron Cebadores específicos para qPCR.
4. Análisis de los datos con los paquetes de software miRanda y RNAhybrid.

Resultados:

ü Pico de miARN aparente alrededor de 20-24 nt
ü  168 miARN exclusivamente en niños con neumonía grave asociada al RSV
ü  131 miRNA exclusivamente en aquellos con neumonía leve asociada al RSV 
ü  miARN regulados positivamente en niños con neumonía grave asociada al VSR fueron hsa-miR-1271-5p, hsa-miR-10a-3p, hsa-miR-125b-5p y hsa-miR-30b-3p.

Referencia Bibliográfica

 1.Zhang, X., Huang, F., Yang, D., Peng, T., & Lu, G. Identification of miRNA-mRNA Crosstalk in Respiratory Syncytial Virus- (RSV-) Associated Pediatric Pneumonia through Integrated miRNAome and Transcriptome Analysis. Mediators of Inflammation.  [Internet]. 2020. [citado 9  agosto 2020]. Disponible  en: https://www.hindawi.com/journals/mi/2020/8919534/